制备色谱

兰博工业制备色谱主要特点：
1.双泵可作梯度洗脱
2.可兼作梯度分析 
3.操作简单，检测灵敏度高，稳定性好 
4.长期免维护运行 
5.兼容性好 


    制备色谱是一种非常实用的用于少量样品纯化的技术。制备色谱可以快速分离反应体系混合物中的多种组分，因此对于获得试验反应产物或天然提取物组分的分离尤其有用。

    制备色谱操作流程：上样--展开--检测--刮板--洗脱

    样品要求：因为硅胶板是弱酸性的，对酸不稳定的化合物尽量避免爬大板；对空气，水，有机溶剂稳定； 低沸点的溶剂里要好溶；最好有紫外吸收；极性不能太大（至少展开剂能爬起来）。

    上样：尽量少的溶剂溶解样品，最好是易挥发的，二氯甲烷常用，如果不溶可以加几滴甲醇促溶。可以用一次性滴管塞棉花后剪成毛笔状上样，每个人的办法都不同，小编就是这么弄的，顺便练练毛笔字。上样时也最好像写毛笔字一样一气呵成，这样跑出来的带比较均匀。如样品溶液太多需要上两遍样，先用吹风机吹干溶剂后再上样。通常情况下， 每块20X20的大板上样量：40-60mg; 如果反应比较杂的话，可适当减少上样量；上样的样品带距离两端大约1cm, 距离底边大约2-3cm，总之控制样品带的高度一定要高于展开缸中展开剂的高度。

    展开：展开之前，一定将溶剂吹干或晾干，否则会导致色带的形状不规则。展开剂的选择，先用小板爬样，具体怎么爬小板，请回看往期文章（ TLC薄层层析技术 ），选到合适的展开剂后，配好溶剂爬大板，由于大板和小板由细微的差别，大板展开剂的极性可以稍微比小板展开剂的极性大一点，一样的话也问题不大。跑板最好要跑到快顶端1cm左右，充分展开样品，切记不要跑过，跑过的话，极性小的点可能会被展开剂冲都一起，而极性大的点虽然不会冲到上面，但会变散，不容易判断色带的边缘。

    另外，如果上样的色带较宽或者不规则，可以在展开之前提前利用大极性溶剂预展开2-3cm，将宽色带压缩成窄带，然后拿出来重新吹干，然后再正常展开。

    展开时，和爬小板类似，要保持展缸内较高的蒸汽压，最好用重物压紧展缸盖。如果展缸有裂纹的话，二氯甲烷甲醇体系千万不要用，石油醚乙酸乙酯体系可以考虑，总之效果都不好。

    如果一次展开后，发现分离效果不佳，可以考虑吹干后重复展开。

    检测：产品的判断，通过极性大致判断哪几个色带可能是产品，然后每个色带可以先刮一点，碾碎，加甲醇溶解，过滤送LCMS检测判断。

    能爬大板的样品一般是有紫外吸收的化合物，这样可以准确判断产物的准确位置并取得较好的纯化效果。没有紫外吸收的化合物也可以爬大板，但是得到产物的纯度全靠运气了！建议使用微量柱层析纯化【 25mg的样品如何柱层析？ 】。无紫外吸收的样品可以参照以下方法盲刮，我们将制备板的一侧进行部分显色，活用玻璃刀将TLC板分割下小部分，通过部分的显色情况，来反推整块板的显色情况，所以相对的对板的展开效果的要求比较高，如果爬的色带不规则，那很难得到纯的产物。

    其实不用切割下来，也可以显色，利用滴管在板边缘涂显色剂，然后显色，效果也可以。

    产物色带的判断： 如果有标样点的话，可以跟标样点TLC检测对照；如果没有标样点的话可以将TLC—LCMS或NMR组合判断；有时在大板展开后，可能会出现像下方第3块板的情况，两条色带距离特别近，不好判别是不是一个东西，造成这种状况的原因可能是过载或受潮，建议大家将两条色带分别刮取后与标点对照来展开判断是不是一个东西，再确定能不能合并。
    刮板：判断好色带后，在紫外灯下，用铅笔描好荧光带，开始刮板。 带好口罩很重要，小编是用平头雕刻笔刀刮板的，非常好用。另外非常重要的是，在确定得到所需产物之前，不要轻易丢弃制备板。

    洗脱：刮好的硅胶，量少的话，可以隔着称量纸用试管擀碎。量多的话，直接装到自封袋里面随便蹂躏，直到成粉末为止。粉末状的硅胶样品的洗脱，大部分人是直接加溶剂泡出来。但小编用的是，把硅胶粉直接装到柱子（有底层砂芯的那种）里，上层铺一薄薄的石英砂，直接像过柱子一样在上层加溶剂压出来，这种方法的好处就是，对于溶解性不好的样品也可以 用相对较少的溶剂洗快速洗出产品。加入溶剂洗脱的时候可以随时点板看产品是否已经*洗出。 尽量选择溶解度好并且极性小的溶剂，通常可用二氯甲烷或者乙酸乙酯，如果化合物溶解度较差时，也可选用二氯甲烷：甲醇10：1的混合溶剂进行洗脱，防止溶解过多硅胶，洗脱剂避免加入过多的甲醇。

制备色谱